文章目录

1 材料和方法

1.1 临床资料

1.2 细胞培养与主要试剂

1.3 实验方法

    1.3.1 免疫组织化学检测

    1.3.2 细胞转染与分组

    1.3.3 实时荧光定量聚合酶链反应（real-timefluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）检测

    1.3.4 蛋白质印迹法（Western blot）检测

    1.3.5 CCK-8增殖实验

    1.3.6 细胞划痕愈合实验

    1.3.7 Transwell小室实验

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 DIAPH3在胃癌组织中的表达升高

2.2 胃癌组织中DIAPH3表达水平与临床病理学特征的相关性

2.3 基因修饰后胃癌细胞中DIAPH3蛋白质和m RNA的表达

2.4 DIAPH3通过增强cyclin D1的表达促进胃癌细胞的增殖

2.5 DIAPH3通过EMT促进胃癌细胞的迁移和侵袭

3 讨论

文章摘要:背景与目的:胃癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一,但其发病机制尚不清楚。Diaphanous相关成蛋白3（diaphanous-related formin 3,DIAPH3）对多种肿瘤的发生、发展具有重要作用,但其在胃癌中的作用未见报道。探讨DIAPH3在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法:利用基因表达谱分析（gene expression profiling interactive analysis,GEPIA）数据库在线分析DIAPH3在胃癌组织中的表达;收集2020年1月—2020年12月年新乡医学院第四临床学院病理科保存的62例胃癌患者的石蜡包埋组织及配对癌旁组织标本,采用免疫组织化学染色方法检测胃癌组织中DIAPH3的表达,并进行临床病理学相关性分析;采用蛋白质印迹法（Western blot）检测敲低或过表达DIAPH3后对DIAPH3、细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（vimentin）及N-钙黏蛋白（N-cadherin）蛋白质水平的变化。采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）检测敲低或过表达DIAPH3后对DIAPH3转录水平表达的影响。利用细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK-8）实验检测细胞增殖;利用划痕愈合实验检测细胞迁移;利用transwell小室实验检测细胞侵袭。结果:GEPIA数据库在线分析显示,与胃癌癌旁组织相比,DIAPH3 m RNA在胃癌组织中表达升高（P<0.05）;胃癌组织中DIAPH3的阳性表达率为70.97%（44/62）,高于胃癌癌旁组织16.13%（10/62）,差异有统计学意义（P<0.01）;与高中分化组比较,低分化组DIAPH3表达升高（P<0.05）;与无淋巴结转移组相比,有淋巴结转移组DIAPH3表达升高（P<0.05）。干扰DIAPH3组细胞增殖活力、细胞迁移率和细胞侵袭数均低于阴性对照组（P<0.05）;过表达DIAPH3组细胞增殖活力、细胞迁移率和细胞侵袭数均高于过表达对照组（P<0.05）。过表达DIAPH3后干扰cyclin D1,胃癌细胞株的增殖活力低于过表达DIAPH3组,高于过表达对照组（P<0.05）。过表达DIAPH3后干扰vimentin,胃癌细胞株的细胞迁移率和细胞侵袭数低于过表达DIAPH3组,高于过表达对照组（P<0.05）。与干扰对照组相比,干扰DIAPH3组E-cadherin蛋白质表达增加,DIAPH3、cyclin D1、vimentin和N-cadherin蛋白质表达降低（P<0.05）;与过表达对照组相比,过表达DIAPH3组中E-cadherin蛋白质表达降低,DIAPH3、cyclin D1、vimentin和N-cadherin蛋白质表达增加（P<0.05）。在敲低或过表达DIAPH3胃癌细胞株中,DIAPH3在m RNA水平均显著降低或升高（P<0.05）。结论:DIAPH3可促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其作用与上调cyclin D1、促进上皮-间充质转化有关。

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